干擾實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑榉治鰳颖颈旧砗蜆颖臼褂眠^(guò)程中潛在的干擾物質(zhì),確定干擾物濃度/水平和干擾實(shí)驗(yàn)的接受標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)干擾實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)有國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)布的《中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WST 416-2013《干擾實(shí)驗(yàn)指南》》(以下簡(jiǎn)稱“《干擾實(shí)驗(yàn)指南》”),CLSI發(fā)布的《EP7-A2:Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition》
(以下簡(jiǎn)稱“CLSI-EP7-A2”)等。所以干擾實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)思路較明確,但所涉及內(nèi)容較多,所以小編在此篇中主要梳理一下上述2個(gè)文件中所涉及的主要內(nèi)容,其內(nèi)容適用范圍為定性檢測(cè)試劑干擾評(píng)估實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。?
干擾實(shí)驗(yàn)一般可采用配對(duì)比對(duì)的方式,比較干擾樣本和不包含或含正常濃度水平干擾物樣本檢測(cè)結(jié)果間差異。如果差異超出接受范圍,再進(jìn)一步研究該干擾物質(zhì)的濃度水平。實(shí)施干擾實(shí)驗(yàn)基本上分為以下步驟:干擾物選擇、干擾物的實(shí)驗(yàn)濃度、實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本選擇與制備、確定干擾實(shí)驗(yàn)的接受標(biāo)準(zhǔn),下面進(jìn)行一一講解。
第一、?干擾物選擇
干擾實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前應(yīng)根據(jù)被評(píng)價(jià)方法的檢測(cè)原理和預(yù)期用途列出可能引起干擾效果的物質(zhì)清單。常見(jiàn)的可能產(chǎn)生干擾作用的物質(zhì)有:
樣本中的異常物質(zhì):高濃度的血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯。
藥物:常見(jiàn)處方與非處方藥,接受某項(xiàng)目檢測(cè)的特定病人群體中常用的藥物。
代謝物:在特定病人群體中可能出現(xiàn)的異常生化代謝物與藥物代謝物。
樣本添加劑及在樣本采集與處理過(guò)程中可與之接觸的物質(zhì):抗凝劑(肝素、EDTA、檸檬酸鹽、草酸鹽等)與防腐劑(NaF、HCl、碘醋酸鹽等),血清分離膠,樣本采集容器及膠塞、導(dǎo)管、導(dǎo)管沖冼液、皮膚消毒劑、手部清潔劑、玻璃清洗液、手套粉未等。
文獻(xiàn)中提及的對(duì)與被評(píng)價(jià)方法類似的其他方法有干擾作用的物質(zhì)。
飲食:咖啡因、β-胡蘿卜素、罌粟籽等。
第二、干擾物的實(shí)驗(yàn)濃度
進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)時(shí)干擾物的濃度可根據(jù)表1中的原則確定,常見(jiàn)可能內(nèi)源性干擾物的建議實(shí)驗(yàn)濃度見(jiàn)《干擾實(shí)驗(yàn)指南》附錄C或CLSI-EP7-A2文件附錄D(appendix D.Interference Test Concentrations for Endogenous Analytes),藥物干擾物的建議實(shí)驗(yàn)濃度請(qǐng)參見(jiàn)有關(guān)文獻(xiàn)。
(表1 干擾物的實(shí)驗(yàn)濃度確定原則)
第三、實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本制備
建議采用包含弱陽(yáng)性樣本在內(nèi)的至少兩個(gè)靶物質(zhì)濃度水平的樣本進(jìn)行干擾研究。干擾實(shí)驗(yàn)樣本形式可選擇臨床真實(shí)樣本或采用人工添加干擾物的形式制備。以下為采用人工添加干擾物的形式制備方法:
1、基礎(chǔ)樣本
從未服用過(guò)藥物的健康人群中采集新鮮標(biāo)本(血清、尿液等),將標(biāo)本混勻后即成為基礎(chǔ)樣本。
如新鮮標(biāo)本難以取得,也可采用冰凍或凍干樣本。但應(yīng)注意這類樣本中含有防腐劑與穩(wěn)定劑或其他可能會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響的成分。因此在應(yīng)用此類樣本之前應(yīng)參照相應(yīng)國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
確定基礎(chǔ)樣本中的被測(cè)量濃度,可通過(guò)添加純分析物使樣本中被測(cè)量濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平。
2、干擾物原液
干擾物質(zhì)的純品多為固體,需要用適當(dāng)?shù)娜軇⑵淙芙猓瞥筛蓴_物原液。如所用的是藥品級(jí)制品,應(yīng)注意所含賦形劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、著色劑、調(diào)味劑、金屬氧化物、填充物等對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響。
溶劑應(yīng)使干擾物充分溶解且不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。常用溶劑有純水、HCl 或NaOH溶液、乙醇或甲醇、丙酮、二甲基亞砜等。
原液濃度應(yīng)至少20倍于實(shí)驗(yàn)濃度,以減少對(duì)基礎(chǔ)樣本基質(zhì)的稀釋。應(yīng)注意防止有機(jī)溶劑的揮發(fā)并考慮其在水中的溶解度。
常見(jiàn)干擾物溶解方式見(jiàn)CLSI-EP7-A2文件附錄G(AppendixG.Preparation of Test Solutions for Interferece Testing)。
3、實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本
以20倍于實(shí)驗(yàn)濃度的干擾物原液為例,實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本的制備方法見(jiàn)表2。注意樣本制備時(shí)取樣體積;
表2 實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本的制備方法
第四、?確定干擾實(shí)驗(yàn)的接受標(biāo)準(zhǔn)
可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn),設(shè)置合理的結(jié)果接受標(biāo)準(zhǔn),并詳述設(shè)定依據(jù)。對(duì)于可給出量值數(shù)據(jù)或計(jì)數(shù)結(jié)果的定性檢測(cè)試劑,如OD值、Ct值,一般可依據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途、生物學(xué)變異等設(shè)定產(chǎn)品的可接受范圍。
附:常見(jiàn)內(nèi)源干擾物的建議實(shí)驗(yàn)濃度及溶解方式: