項(xiàng)目

2015版中國(guó)藥典

2020版中國(guó)藥典

對(duì)比說(shuō)明

/

????無(wú)菌檢查法系用于檢査藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無(wú)的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。
???? 無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢査的要求，檢驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。

????無(wú)菌檢查法系用于檢査藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器械、原料、輔料及其他品種是否無(wú)的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。
???? 無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢査的要求，檢驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及受控環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

1.“醫(yī)療器具”改為“醫(yī)療器械”；
?2.“環(huán)境”改為“受控環(huán)境”；
?3.“監(jiān)控”改為“監(jiān)測(cè)”。

培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件

????????培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或成品培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2?25°C、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。

????????培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或商品化的預(yù)制培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基若不及時(shí)使用，應(yīng)置于無(wú)菌密閉容器中，在2?25°C、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。

1.“成品培養(yǎng)基”改為“商品化的預(yù)制培養(yǎng)基”；
?2.制備好的培養(yǎng)基刪除非密閉容器的保存條件；
?3.制備好的培養(yǎng)基“密閉容器”保存改為“無(wú)菌密閉容器”，保存時(shí)間由“一般可在一年內(nèi)使用”改為“經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用”。

硫乙酵酸鹽流體培養(yǎng)基

胰酪胨??? 15.0g???????????? 氯化鈉???? 2.5g
?酵母浸出粉??? ?5.0g??????

新配制的0.1%刃天青溶液 1.0ml
?無(wú)水葡萄糖??? ?5.0g??????????????????
?L-胱氨酸??? ?0.5g??????????

瓊脂???? 0.75g
?硫乙醇酸鈉??? ?0.5g??????

水??? 1000ml
?(或硫乙醇酸）（0.3ml）

胰酪胨??? 15.0g???????????? 氯化鈉???? 2.5g
?酵母浸出粉??? ?5.0g??????

新配制的0.1%刃天青溶 1.0ml
?葡萄糖/無(wú)水葡萄糖?????5.5g/5.0g

L-胱氨酸??? 0.5g?????????? 瓊脂???? 0.75g
?硫乙醇酸鈉??? ?0.5g??????

水??? 1000ml
?(或硫乙醇酸）（0.3ml）

增加葡萄糖選項(xiàng)

????除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH , 使滅菌后在25℃的pH值為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色)不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
???? 除另有規(guī)定外，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30?35℃培養(yǎng)。

????除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH , 使滅菌后在25℃的pH值為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色)不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/3，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
???? 除另有規(guī)定外，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30?35℃培養(yǎng)。

“1/5”改為“1/3”

中和或滅活用培養(yǎng)基

????按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗(yàn)。

????按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌前或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗(yàn)。

“滅菌”改為“滅菌前”

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

/

新增“馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基”

培養(yǎng)基的適用性檢査

無(wú)菌性檢查：
???? 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5 ?支(瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

無(wú)菌性檢查：
???? 每批培養(yǎng)基一般隨機(jī)取不少于5 支(瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

增加“一般”

靈敏度檢査-菌種：
???? 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。

靈敏度檢査-菌種：
???? 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存和確認(rèn)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。

增加“和確認(rèn)”

靈敏度檢査-菌液制備：
???? 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30?35°C培養(yǎng)18?24小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20?25°C培養(yǎng)24?48小時(shí)，上述培養(yǎng)物用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu（菌落形成單位）的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，20?25℃培養(yǎng)5?7?天，加入3?5ml含0.05% ?(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)小于100cfu的孢子懸液。
???? 菌懸液若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2?8°C可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2?8°C，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。

靈敏度檢査-菌液制備：
???? 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30?35°C培養(yǎng)18?24小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20?25°C培養(yǎng)2?3天，上述培養(yǎng)物用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20?25℃培養(yǎng)5?7?天或直到獲得豐富的孢子，加入適量含0.05% ?(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05% ?(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。
???? 菌懸液若在室溫下放置，一般應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2?8°C可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2?8°C，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。

1.白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物培養(yǎng)時(shí)間“24?48小時(shí)”改為“2?3天”；
?2.“每1ml含菌數(shù)小于100cfu（菌落形成單位）的菌懸液”改為“適宜濃度菌懸液”；
?3.“沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基”改為“沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基”；
?4.“20?25℃培養(yǎng)5?7天”改為“20?25℃培養(yǎng)5?7?天或直到獲得豐富的孢子”；
?5.“3?5ml”改為“適量”；
?6.“0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液”改為“含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液”；
?7.“每1ml含孢子數(shù)小于100cfu的孢子懸液”改為“適宜濃度的孢子懸液”；
?8.“應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用”改為“一般應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用”。

培養(yǎng)基接種：
???? 取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種小于l00cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。

培養(yǎng)基接種：
???? 取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照；取適宜裝量的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照。接種細(xì)菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)3天，接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。

1.“每管裝量為12ml”“每管裝量為9ml”改為“適宜裝量”；
?2.“小于100cfu”改為“不大于100 cfu”；
?3.培養(yǎng)時(shí)間“3天”“5天”改為“接種細(xì)菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)3天，接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天”；
?4.刪除“逐日觀察結(jié)果”

稀釋液、沖洗液及其制備方法

稀釋液、沖洗液配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。
?1.0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液
???? 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.2，分裝，滅菌。
?2.pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液
??? ?取磷酸二氫鉀3.56g，無(wú)水磷酸氫二鈉5.77g，氯化鈉4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。
???? 根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液（如0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液）。
???? 如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。

稀釋液、沖洗液配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。
?1.0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液
???? 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，必要時(shí)濾過(guò)使澄清，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.2，分裝，滅菌。
?2.pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液
??? ?取磷酸二氫鉀3.56g，無(wú)水磷酸氫二鈉5.77g，氯化鈉4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微溫溶解，必要時(shí)濾過(guò)使澄清，分裝，滅菌。
???? 根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證的適宜溶液作為稀釋液或沖洗液（如0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液）。
???? 如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。

1.“濾清”改為“必要時(shí)濾過(guò)使澄清”；
?2.刪除“過(guò)”“的”

方法適用性試驗(yàn)

薄膜過(guò)濾法：
???? 取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入小于100cfu的試驗(yàn)菌，過(guò)濾。加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為對(duì)照。置規(guī)定溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天，各試驗(yàn)菌同法操作。

薄膜過(guò)濾法：
?????按供試品的無(wú)菌檢查要求，取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量，采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入不大于100cfu的試驗(yàn)菌，過(guò)濾。加培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)，接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌的濾筒內(nèi)加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；接種枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒內(nèi)加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為對(duì)照。置規(guī)定溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。

1.“小于100cfu”改為“不大于100 cfu”；
?2.增加“按供試品的無(wú)菌檢查要求”；
?3.“加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)”改為“加培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)，接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌的濾筒內(nèi)加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；接種枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒內(nèi)加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基”；
?4.刪除“各試驗(yàn)菌同法操作”。

直接接種法：
???? 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基6管，分別接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基6管，分別接入小于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。

直接接種法：
???? 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基6管，分別接入不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基6管，分別接入不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管按供試品的無(wú)菌檢查要求，接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。

1.“小于100cfu”改為“不大于100 cfu”；
?2.增加“按供試品的無(wú)菌檢查要求”。

供試品的無(wú)菌檢查

檢驗(yàn)量：
???? 是指供試品每個(gè)最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量（g或ml）。除另有規(guī)定外，供試品檢驗(yàn)量按表3規(guī)定。若每支(瓶)供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過(guò)濾。

檢驗(yàn)量：
???? 是指供試品每個(gè)最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量。除另有規(guī)定外，供試品檢驗(yàn)量按表3規(guī)定。若每支(瓶)供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的內(nèi)容物全部過(guò)濾。

1.刪除“g或ml”；
?2.“應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過(guò)濾”改為“應(yīng)將所有容器內(nèi)的內(nèi)容物全部過(guò)濾”

陽(yáng)性對(duì)照：
???? 應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌：無(wú)抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對(duì)照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對(duì)照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對(duì)照菌。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同方法適用性試驗(yàn)，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無(wú)
?菌檢查時(shí)每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)72小時(shí)內(nèi)應(yīng)生長(zhǎng)良好。

陽(yáng)性對(duì)照：
???? 應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌：無(wú)抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對(duì)照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對(duì)照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對(duì)照菌。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同方法適用性試驗(yàn)，加菌量不大于100cfu，供試品用量同供試品無(wú)菌檢查時(shí)每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)不超過(guò)5天，應(yīng)生長(zhǎng)良好。

1.“小于100cfu”改為“不大于100 cfu”；

2.“培養(yǎng)72小時(shí)”改為“培養(yǎng)不超過(guò)5天”。

供試品處理及接種培養(yǎng)基

操作時(shí)，用適宜的消毒液對(duì)供試品容器表面進(jìn)行徹底消
?毒，如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無(wú)菌器材(如帶有除菌過(guò)濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)人無(wú)菌空氣，再按無(wú)菌操作啟開(kāi)容器取出內(nèi)容物。
???? ?除另有規(guī)定外，按下列方法進(jìn)行供試品處理及接種培
?養(yǎng)基。

供試品處理及接種培養(yǎng)基

操作時(shí)，用適宜的方法對(duì)供試品容器表面進(jìn)行徹底消毒，如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無(wú)菌器材(如帶有除菌過(guò)濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)人無(wú)菌空氣，再按無(wú)菌操作啟開(kāi)容器取出內(nèi)容物。
???? ?除另有規(guī)定外，按下列方法進(jìn)行供試品處理及接種培
?養(yǎng)基。

“消毒液”改為“方法”

1.?薄膜過(guò)濾法
???? 薄膜過(guò)濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器。無(wú)菌檢査用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm，直徑約為50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。
???? 水溶性供試液過(guò)濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾，以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

1.?薄膜過(guò)濾法
???? 薄膜過(guò)濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。無(wú)菌檢査用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm。濾膜直徑約為50mm，若使用其他尺寸的濾膜，應(yīng)對(duì)稀釋液和沖洗液體積進(jìn)行調(diào)整，并重新驗(yàn)證。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。
???? 水溶性供試液過(guò)濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾，以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，總沖洗量一般不超過(guò)500ml，最高不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

1.增加“若使用其他尺寸的濾膜，應(yīng)對(duì)稀釋液和沖洗液體積進(jìn)行調(diào)整，并重新驗(yàn)證”；
?2.“總沖洗量不得超過(guò)1000ml”改為“總沖洗量一般不超過(guò)500ml，最高不得超過(guò)1000ml”。

水溶液供試品：
???? 取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含不少于100ml適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗(yàn)。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1 份濾器中加入100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1 份濾器中加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。生物制品樣品沖洗后，2 份濾器中加入100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1份濾器中加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

水溶性液體供試品：
?????取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含不少于100ml適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗(yàn)。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1 份濾器中加入100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1 份濾器中加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。生物制品樣品沖洗后，2 份濾器中加入100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1份濾器中加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

“水溶液供試品”改為“水溶性液體供試品”

水溶性固體供試品：
???? 取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶，然后照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。
?
?非水溶性供試品：
???? 取規(guī)定量，直接過(guò)濾；或混合溶于適量含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，立即過(guò)濾。用含0.1%?1%聚山梨酯80的沖洗液沖洗濾膜至少3 次。加入含或不含聚山梨酯80的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)基照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。

水溶性固體和半固體供試品：
???? 取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶，然后照水溶性液體供試品項(xiàng)下的方法操作。
?
?非水溶性供試品：
???? 取規(guī)定量，直接過(guò)濾；或混合溶于適量含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，立即過(guò)濾。用含0.1%?1%聚山梨酯80的沖洗液沖洗濾膜至少3 次。加入含或不含聚山梨酯80的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)基照水溶性液體供試品項(xiàng)下的方法操作。

1.“水溶性固體供試品”改為“水溶性固體和半固體供試品”；
?2.“水溶液供試品”改為“水溶性液體供試品”。

可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品：
???? 取規(guī)定量，混合至適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，但溫度不得超過(guò)44°C，趁熱迅速過(guò)濾。對(duì)仍然無(wú)法過(guò)濾的供試品，于含有適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于100ml的稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作為供試液過(guò)濾。過(guò)濾后濾膜沖洗及接種培養(yǎng)基照非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。
?①無(wú)菌十四烷酸異丙酯的制備? 采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾除菌，選用孔徑為0.22μm的適宜濾膜。

可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品：
???? 取規(guī)定量，混合至適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，加熱溫度一般不超過(guò)40℃，最高不得超過(guò)44°C，趁熱迅速過(guò)濾。對(duì)仍然無(wú)法過(guò)濾的供試品，于含有適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于100ml的適宜稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作為供試液過(guò)濾。過(guò)濾后濾膜沖洗及接種培養(yǎng)基照非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。
?①無(wú)菌十四烷酸異丙酯的制備? 采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾除菌，選用孔徑為0.22μm的適宜濾膜，或其他適宜的滅菌方法。

1.“溫度不得超過(guò)44°C”改為“加熱溫度一般不超過(guò)40℃，最高不得超過(guò)44℃”；
?2.“稀釋液”改為“適宜稀釋液”；
?增加“或其他適宜的滅菌方法”。

無(wú)菌氣（噴）霧劑供試品：
???? 取規(guī)定量，將各容器置-20°C或其他適宜溫度冷凍約1 小時(shí)，取出，以無(wú)菌操作迅速在容器上端鉆一小孔，釋放拋射劑后再無(wú)菌開(kāi)啟容器，并將供試品轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中混合，供試品亦可采用其他適宜的方法取出。然后照水溶液或非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。

無(wú)菌氣霧劑供試品：
???? 取規(guī)定量，采用專(zhuān)用設(shè)備將供試品轉(zhuǎn)移至封閉式薄膜過(guò)濾器中。或?qū)⒏魅萜髦?20°C或其他適宜溫度冷凍約1 小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開(kāi)啟部位或閥門(mén)，正置容器，用無(wú)菌鋼錐或針樣設(shè)備以無(wú)菌操作迅速在與容器閥門(mén)結(jié)構(gòu)相匹配的適宜位置鉆一小孔，鉆孔后應(yīng)無(wú)明顯拋射劑拋出，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩釋出，釋放拋射劑后再無(wú)菌開(kāi)啟容器，并將供試液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中混合，必要時(shí)用沖洗液沖洗容器內(nèi)壁。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。然后照水溶性液體供試品或非水溶性供試品項(xiàng)下的方法操作。

1.“無(wú)菌氣（噴）霧劑供試品”改為“無(wú)菌氣霧劑供試品”；
?2.增加“采用專(zhuān)用設(shè)備將供試品轉(zhuǎn)移至封閉式薄膜過(guò)濾器中”；
?3.增加“迅速消毒供試品開(kāi)啟部位或閥門(mén)，正置容器，用無(wú)菌鋼錐或針樣設(shè)備以無(wú)菌操作迅速在與容器閥門(mén)結(jié)構(gòu)相匹配的適宜位置鉆一小孔，鉆孔后應(yīng)無(wú)明顯拋射劑拋出，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩釋出”；
?4.增加“必要時(shí)用沖洗液沖洗容器內(nèi)壁”；
?5.“水溶液或非水溶性制劑供試品”改為“水溶性液體供試品或非水溶性供試品”。

裝有藥物的注射器供試品：
???? 取規(guī)定量，將注射器中的內(nèi)容物（若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解）直接過(guò)濾，或混合至含適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，然后照水溶液或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所配帶的無(wú)菌針頭的無(wú)菌檢查。

裝有藥物的注射器供試品：
???? 取規(guī)定量，將注射器中的內(nèi)容物（若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解）直接過(guò)濾，或混合至含適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，然后照水溶性液體或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對(duì)包裝中所配帶的針頭等要求無(wú)菌的部件進(jìn)行無(wú)菌檢查。

1.“水溶液”改為“水溶性液體”；
?2.“同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所配帶的無(wú)菌針頭的無(wú)菌檢查”改為“同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對(duì)包裝中所配帶的針頭等要求無(wú)菌的部件進(jìn)行無(wú)菌檢查”。

具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）供試品：
???? 取規(guī)定量，每個(gè)最小包裝用50?100ml沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無(wú)菌檢査。

具有導(dǎo)管的醫(yī)療器械（輸血、輸液袋等）供試品：
?????除另有規(guī)定外，?取規(guī)定量，每個(gè)最小包裝用適量的（通常50?100ml）沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶性液體供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對(duì)包裝中所配帶的針頭等要求無(wú)菌的部件進(jìn)行無(wú)菌檢查。

1.“醫(yī)療器具”改為“醫(yī)療器械”；
?2.增加“除另有規(guī)定外”；
?3.增加“適量的”；
?4.“水溶液供試品”改為“水溶性液體供試品”；
?5.“同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無(wú)菌檢査”改為“同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對(duì)包裝中所配帶的針頭等要求無(wú)菌的部件進(jìn)行無(wú)菌檢查”。

混懸液等非澄清水溶液供試品：
???? 取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中。
?
?固體供試品：
???? 取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中?；蚣尤脒m宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。
?
?非水溶性供試品：
???? 取規(guī)定量，混合，加入適量的聚山梨酯80或其他適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，等量接種至各管培養(yǎng)基中?；蛑苯拥攘拷臃N至含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。

混懸液等非澄清水溶性液體供試品：
???? 取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中。
?
?固體供試品：
???? 取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中。或加入適宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。
?
?非水溶性供試品：
???? 取規(guī)定量，混合，加入適量的聚山梨酯80或其他適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，等量接種至各管培養(yǎng)基中?；蛑苯拥攘拷臃N至含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。

“水溶液供試品”改為“水溶性液體供試品”

敷料供試品：
???? 取規(guī)定數(shù)量，以無(wú)菌操作拆開(kāi)每個(gè)包裝，于不同部位剪取約100mg或lcm×3cm的供試品，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
?
?腸線、縫合線等供試品：
???? 腸線、縫合線及其他一次性使用的醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝，無(wú)菌拆開(kāi)包裝，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
?
?滅菌醫(yī)用器具供試品：
???? 取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
?
?放射性藥品：
???? 取供試品1 瓶（支），等量接種于裝量為7.5ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。每管接種量為0.2ml。

敷料供試品：
???? 取規(guī)定數(shù)量，以無(wú)菌操作拆開(kāi)每個(gè)包裝，于不同部位剪取約100mg或lcm×3cm的供試品，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
?
?腸線、縫合線等供試品：
??? ?腸線、縫合線及其他一次性使用的醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝，無(wú)菌拆開(kāi)包裝，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
?
?滅菌醫(yī)療器械供試品：
?????除另有規(guī)定外，取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
?
?放射性藥品：
???? 取供試品1 瓶（支），等量接種于裝量為7.5ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。每管接種量為0.2ml。

1.“醫(yī)用器具”改為“醫(yī)療器械”；
?2.增加“除另有規(guī)定外”；

培養(yǎng)及觀察：
???? 將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份，一份置30?35°C培養(yǎng)，一份置20?25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

培養(yǎng)及觀察：
???? 將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)不少于14天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份，一份置30?35°C培養(yǎng)，一份置20?25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液不少于1ml轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于4天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

1.“培養(yǎng)14天”改為“培養(yǎng)不少于14天”；
?2.“逐日觀察”改為“定期觀察”；
?3.“適量”改為“不少于1ml”；
?4.“培養(yǎng)3天”改為“將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于4天”。

結(jié)果判斷：
?????陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無(wú)效。
?????若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：
?(1)無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。
?(2)回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。
?(3)供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和(或)無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。
?? ??試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。

結(jié)果判斷：
???? 若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。只有符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可認(rèn)為試驗(yàn)無(wú)效：
?(1)無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。
?(2)回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。
?(3)在陰性對(duì)照中觀察到微生物生長(zhǎng)。
?(4)供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和(或)無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。
???? 試驗(yàn)若經(jīng)評(píng)估確認(rèn)無(wú)效后，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。

1.刪除“陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無(wú)效”；
?2.“當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效”改為“只有符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可認(rèn)為試驗(yàn)無(wú)效”；
?3.增加“在陰性對(duì)照中觀察到微生物生長(zhǎng)”；
?4.“試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效”改為“ 試驗(yàn)若經(jīng)評(píng)估確認(rèn)無(wú)效后”。

“醫(yī)療器具”改為“醫(yī)療器械”。

項(xiàng)目

2015版中國(guó)藥典

2020版中國(guó)藥典

對(duì)比說(shuō)明

/

????當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下述規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌制劑的檢査。

微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

????當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下述規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌制劑的檢査。

?

微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

1.“相應(yīng)”改為“規(guī)定”；

2.“單向流空氣區(qū)域”給為“潔凈空氣區(qū)域”；

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢査

菌液制備：
???? 按表1 規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗(yàn)菌株。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入3?5ml含0.05% ?(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。

菌液制備：
???? 按表1 規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗(yàn)菌株。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05% ?(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05% ?(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。

1.“3?5ml”改為“適量”；
?2.“0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液”改為“含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液”。

?? ?微生物計(jì)數(shù)用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。
???? 按表1 規(guī)定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，置表1 規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗(yàn)菌株平行制備2管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。

????微生物計(jì)數(shù)用的商品化的預(yù)制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。
???? 按表1 規(guī)定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，置表1 規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗(yàn)菌株平行制備2管或2個(gè)平板。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。

1.“成品培養(yǎng)基”改為“商品化的預(yù)制培養(yǎng)基”；
?2.“平皿”改為“平板”。

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

(2)水不溶性非油脂類(lèi)供試品
???? 取供試品，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2 磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1:10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6?8。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

水不溶性非油脂類(lèi)供試品
???? 取供試品，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2 磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1:10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%（ml/ml）的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6?8。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

增加“（ml/ml）”。

氣霧劑、噴霧劑供試品
????????取供試品，置-20°C或其他適宜溫度冷凍約1小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開(kāi)啟部位，用無(wú)菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩全部釋出。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。用無(wú)菌注射器從每一容器中吸出藥液于無(wú)菌容器中混合，然后取樣檢査。

氣霧劑供試品：
???????? 取供試品，置-20°C或其他適宜溫度冷凍約1 小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開(kāi)啟部位或閥門(mén)，正置容器，用無(wú)菌鋼錐或針樣設(shè)備以無(wú)菌操作迅速在與容器閥門(mén)結(jié)構(gòu)相匹配的適宜位置鉆一小孔，供試品各容器的鉆孔大小和深度應(yīng)盡量保持一致，拔出鋼錐時(shí)應(yīng)無(wú)明顯拋射劑拋出，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩釋出。亦可采用專(zhuān)用設(shè)備釋出拋射劑。釋放拋射劑后再無(wú)菌開(kāi)啟容器，并將供試液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中混合，必要時(shí)用沖洗液沖洗容器內(nèi)壁。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。然后取樣檢查。

1.“氣霧劑、噴霧劑供試品”改為“氣霧劑供試品”；
?2.增加“迅速消毒供試品開(kāi)啟部位或閥門(mén)，正置容器，用無(wú)菌鋼錐或針樣設(shè)備以無(wú)菌操作迅速在與容器閥門(mén)結(jié)構(gòu)相匹配的適宜位置鉆一小孔，供試品各容器的鉆孔大小和深度應(yīng)盡量保持一致，拔出鋼錐時(shí)應(yīng)無(wú)明顯拋射劑拋出，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩釋出。亦可采用專(zhuān)用設(shè)備釋出拋射劑”；
?3.增加“必要時(shí)用沖洗液沖洗容器內(nèi)壁”。

貼膏劑供試品
?????取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無(wú)菌玻璃或塑料器皿上，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無(wú)菌多孔材料（如無(wú)菌紗布），避免貼膏劑粘貼在一起。將處理后的貼膏劑放入盛有適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋液的容器中，振蕩至少30分鐘。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

貼劑、貼膏劑供試品
?????取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無(wú)菌玻璃或塑料器皿上，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無(wú)菌多孔材料（如無(wú)菌紗布），避免供試品粘貼在一起。將處理后的供試品放入盛有適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋液的容器中，振蕩至少30分鐘。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

“貼膏劑供試品”改為“貼劑、貼膏劑供試品”。

接種和稀釋
???? 按下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋?zhuān)苽湮⑸锘厥赵囼?yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過(guò)供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇
?最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。

接種和稀釋
???? 按表1規(guī)定及下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋?zhuān)苽湮⑸锘厥赵囼?yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過(guò)供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。

增加“表1規(guī)定”。

抗菌活性的去除或滅活

中和劑或滅活劑（表2 )可用于消除干擾物的抑菌活性，最好在稀釋液或培養(yǎng)基滅菌前加入。若使用中和劑或滅活劑，試驗(yàn)中應(yīng)設(shè)中和劑或滅活劑對(duì)照組，即取相應(yīng)量稀釋液替代供試品同試驗(yàn)組操作，以確認(rèn)其有效性和對(duì)微生物無(wú)毒性。中和劑或滅活劑對(duì)照組的菌落數(shù)與菌液對(duì)照組的菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5?2范圍內(nèi)。

抗菌活性的去除或滅活

中和劑或滅活劑（表2 )可用于消除干擾物的抑菌活性，最好在稀釋液或培養(yǎng)基滅菌前加入。若使用中和劑或滅活劑，試驗(yàn)中應(yīng)設(shè)中和劑或滅活劑對(duì)照組，即取相應(yīng)量含中和劑或滅活劑的稀釋液替代供試品同試驗(yàn)組操作，以確認(rèn)其有效性和對(duì)微生物無(wú)毒性。中和劑或滅活劑對(duì)照組的菌落數(shù)與菌液對(duì)照組的菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5?2范圍內(nèi)。

“稀釋液”改為“含中和劑或滅活劑的稀釋液”

涂布法
?取15?20ml溫度不超過(guò)45℃的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，注入直徑90mm的無(wú)菌平皿，凝固，制成平板，采用適宜的方法使培養(yǎng)基表面干燥。若使用直徑較大的平皿，培養(yǎng)基用量也應(yīng)相應(yīng)增加。每一平板表面接種上述照“供試液的制備” “接種和稀釋” 和“抗菌活性的去除或滅活” 制備的供試液不少于0.1ml。按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。同法測(cè)定供試品對(duì)照組及菌液對(duì)照組菌數(shù)。計(jì)算各試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)。

涂布法
?取適量（通常為15?20ml）溫度不超過(guò)45℃的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，注入直徑90mm的無(wú)菌平皿，凝固，制成平板，采用適宜的方法使培養(yǎng)基表面干燥。若使用直徑較大的平皿，培養(yǎng)基用量也應(yīng)相應(yīng)增加。每一平板表面接種上述照“供試液的制備” “接種和稀釋” 和“抗菌活性的去除或滅活” 制備的供試液不少于0.1ml。按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。同法測(cè)定供試品對(duì)照組及菌液對(duì)照組菌數(shù)。計(jì)算各試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)。

“15?20ml”改為“適量（通常為15?20ml）”；

(2)薄膜過(guò)濾法
???? 薄膜過(guò)濾法所采用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm，直徑一般為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。供試品及其溶劑應(yīng)不影響濾膜材質(zhì)對(duì)微生物的截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml。總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

(2)薄膜過(guò)濾法
???? 薄膜過(guò)濾法所采用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm，直徑一般為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。供試品及其溶劑應(yīng)不影響濾膜材質(zhì)對(duì)微生物的截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml。總沖洗量一般不超過(guò)500ml，最多不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

“總沖洗量不得超過(guò)1000ml”改為“總沖洗量一般不超過(guò)500ml，最多不得超過(guò)1000ml”。

????接種管置30?35°C培養(yǎng)3天，逐日觀察各管微生物生長(zhǎng)情況。如果由于供試品的原因使得結(jié)果難以判斷，可將該
?管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)1?2天，觀察是否有微生物生長(zhǎng)。根據(jù)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)從表3查被測(cè)供試品每1g或每1ml中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)。

接種管置30?35°C培養(yǎng)3天，逐日觀察各管微生物生長(zhǎng)情況。如果由于供試品的原因使得結(jié)果難以判斷，可將該
?管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)1?2天，觀察是否有微生物生長(zhǎng)。根據(jù)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)從表3查被測(cè)供試品每1g或每1ml或10cm²中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)。

增加“10cm²”

供試品檢查

檢驗(yàn)量
???? 檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量(g、ml或cm²) ?。
???? 一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)最小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。
???? 除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑為100cm²；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2 個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，大
?蜜丸還不得少于4 丸，膜劑還不得少于4 片。

檢驗(yàn)量
???? 檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量(g、ml或cm²) ?。
???? 一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)最小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。
???? 除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑、貼劑和貼膏劑為100cm²；檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2 個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4 丸，膜劑、貼劑和貼膏劑還不得少于4 片。
???? 貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。若供試品處方中每一劑量單位（如片劑、膠囊劑）活性物質(zhì)含量小于或等于1mg，或每1g或1ml（指制劑）活性物質(zhì)含量低于1mg時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于10個(gè)劑量單位或10g或10ml供試品；若樣品量有限或批產(chǎn)量極?。ㄈ纾盒∮?000ml或1000g）的活性物質(zhì)供試品，除另有規(guī)定外，其檢驗(yàn)量最少為批產(chǎn)量的1%，檢驗(yàn)量最少時(shí)需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；若批產(chǎn)量少于200的供試品，檢驗(yàn)量可減少至2個(gè)單位；批產(chǎn)量少于100的供試品，檢驗(yàn)量可減少至1個(gè)單位。

1.“膜劑為100cm²”改為“膜劑、貼劑和貼膏劑為100cm²”；
?2.“膜劑還不得少于4 片”改為“膜劑、貼劑和貼膏劑還不得少于4 片”；
?3.增加“若供試品處方中每一劑量單位（如片劑、膠囊劑）活性物質(zhì)含量小于或等于1mg，或每1g或1ml（指制劑）活性物質(zhì)含量低于1mg時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于10個(gè)劑量單位或10g或10ml供試品；若樣品量有限或批產(chǎn)量極?。ㄈ纾盒∮?000ml或1000g）的活性物質(zhì)供試品，除另有規(guī)定外，其檢驗(yàn)量最少為批產(chǎn)量的1%，檢驗(yàn)量最少時(shí)需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；若批產(chǎn)量少于200的供試品，檢驗(yàn)量可減少至2個(gè)單位；批產(chǎn)量少于100的供試品，檢驗(yàn)量可減少至1個(gè)單位。”

3. ?MPN?法
???? 取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和供試品接種，所有試驗(yàn)管在30?35℃培養(yǎng)3?5天，如果需要確認(rèn)是否有微生物生長(zhǎng)，按方法適用性試驗(yàn)確定的方法進(jìn)行。記錄每一稀釋級(jí)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)，從表3査每1g或1ml供試品中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)。

3. ?MPN?法
???? 取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和供試品接種，所有試驗(yàn)管在30?35℃培養(yǎng)3?5天，如果需要確認(rèn)是否有微生物生長(zhǎng)，按方法適用性試驗(yàn)確定的方法進(jìn)行。記錄每一稀釋級(jí)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)，從表3査每1g或1ml或10cm²供試品中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)。

增加“或10cm²”